微生物實驗報告
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第十次實驗分離產淀粉酶微生物
學院：生命科學學院
專業(yè)：生物科學類
年級：20xx級
姓名：xx
學號：1007040085
20xx年XX月XX日
實驗十分離產淀粉酶的微生物
一、實驗目的
1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）的配制方法。
2、學習各種無菌操作技術，并用此技術進行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。
3、用平板劃線法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。
4、認識為微生物存在的普遍性，體會無菌操作的重要性。
5、掌握分離產淀粉酶微生物的試驗方法和步驟，了解產淀粉酶的微生物種類及形態(tài)。
二、實驗原理
土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現有重要應用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數量不同，一般土壤中細菌數量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機質豐富的土壤中放線苗數量較多；酵母菌在一般土壤中的數量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數量多些。本次實驗從土壤中分離產淀粉酶的微生物，應該取那些富含產淀粉酶的微生物的土樣。從復雜的微生物群體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有
1、簡單單細胞挑取法
2、平板分離法和稀釋涂布平板法
此次實驗采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結合，該方法操作簡單，普遍用于微生物的分離與純化。其原理包括：
1)稀釋后的細胞懸液圖不在平板上可以分離得單個菌株
2)在適合于待分離微生物的生長條件（如營養(yǎng)、酸堿度、溫度與氧等）下培養(yǎng)微生物，或加入某種^v^造成只利于待分離微生物的生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。
3)微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落可以是由一個細胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得純培養(yǎng)。獲得單菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等方法完成。
以淀粉作為惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)未分離細菌，能產淀粉酶的細菌能生長，且菌落周圍出現透明圈（淀粉不透明，被消化后變透明），則產淀粉酶微生物被分離出來。本實驗采用透明圈檢驗法檢測培養(yǎng)物中是否有產淀粉酶微生物的生長。
三、實驗儀器及試劑
1、器材：
培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、、天平、濾紙、pH試紙等。
2、試劑：
配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的原料（牛肉膏、NaCl、瓊脂、蛋白胨）、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。
3、土樣：
取自貴州大學農生樓后土壤10g，地下10cm左右。
四、實驗步驟：
1、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：
1）配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基400ml（用于11個平皿和7支試管斜面）
�。�2）無菌水的制備
分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞后用報紙包扎捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的操作，滅菌備用。
�。�3）器皿的準備
將刻度吸管用報紙包扎，培養(yǎng)皿裝入專用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。
2）倒11個平板和7支試管斜面，包扎，121℃、滅菌30min.
2、制備土壤稀釋液：
稱取土樣10g，放入盛有250ml無菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩搖勻10min使土和水充分混合，然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無菌操作），加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此類推分別制成制成、不同稀釋度的土壤溶液。
3、涂布培養(yǎng)：
濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養(yǎng)的對象，將其分別涂布在3個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，共6個培養(yǎng)基，標號，37°C溫箱培養(yǎng)48h。
4、選取目的菌株：
兩天后對土壤溶液的微生物培養(yǎng)基進行觀察，并取兩個菌落形態(tài)完全一致的分散的單個菌落，對其中一個噴灑盧戈氏碘液，觀察其菌落周圍是否出現透明圈，如果出現透明圈說明此菌株產淀粉酶，是目的菌株，記錄細菌明顯的性狀。
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