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生物細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)
篇一：巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)&沉淀實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
【原理】巨噬細(xì)胞是單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的主要細(xì)胞，局域活躍的吞噬功能。吞噬細(xì)胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明顯增強(qiáng)。
在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生后，再給小鼠腹腔注射雞血紅細(xì)胞，30min后處死小鼠，取出腹腔液，以冷亞甲藍(lán)染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)吞噬紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，及觀察吞噬細(xì)胞內(nèi)雞紅細(xì)胞的數(shù)目，以判斷吞噬細(xì)胞的殺傷能力，由此間接地測(cè)定機(jī)體的非特異性免疫水平。
【方法】體內(nèi)法：
�。�1）實(shí)驗(yàn)前3小時(shí)，小鼠腹腔注射6%無(wú)菌淀粉液1ml，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞滲出至腹腔中。
（2）實(shí)驗(yàn)時(shí)，每只小鼠注射雞紅細(xì)胞1ml，輕柔腹部，使其在腹腔中分布均勻，利于吞噬。
�。�3）30min后，將小鼠拉頸處死，固定，打開(kāi)腹腔暴露腸管，用載玻片輕擦腹腔，使腹腔液均勻涂于載玻片過(guò)，再滴一滴0.03%冷亞甲藍(lán)溶液，蓋上蓋玻片。
�。�4）高倍鏡下進(jìn)行觀察，計(jì)數(shù)。
【分析】
在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生后，再給小鼠注射雞紅細(xì)胞后鏡檢腹腔液，可觀察到巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的現(xiàn)象，并且可看到部分雞紅細(xì)胞聚集到吞噬細(xì)胞附近。
二 沉淀反應(yīng) 雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)
【原理】將可溶性抗原與相應(yīng)抗體分別加入瓊脂板上的孔內(nèi)，二者均可發(fā)生擴(kuò)散，并且隨擴(kuò)散距離的增大濃度降低，在抗原抗體比例適宜處形成可見(jiàn)的沉淀線。本實(shí)驗(yàn)是定性實(shí)驗(yàn)，常用于分析抗原抗體的純度關(guān)系以及相互關(guān)系。
【方法】
�。�1）制板：將熔化的1%瓊脂加在載玻片上約5ml
�。�2）打孔：待瓊脂凝固后，將載玻片置于打孔樣板上，用打孔器打孔
（3）加樣：在中央孔內(nèi)加抗體，上下兩孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl
�。�4）結(jié)果觀察：將瓊脂板置于濕盒，37℃一天后觀察結(jié)果。
【結(jié)果】
在中央孔與添加抗原1的孔之間出現(xiàn)沉淀線，有抗原抗體反應(yīng)，為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明抗原1與抗體相對(duì)應(yīng)。中央孔與添加抗原2的孔之間沒(méi)有沉淀線，說(shuō)明抗原2與抗體之間不相對(duì)應(yīng)。
【分析】抗體與抗原發(fā)生擴(kuò)散時(shí)，隨擴(kuò)散距離的增大濃度降低，在抗原抗體比例適宜處形成可見(jiàn)的沉淀線。當(dāng)有沉淀線出現(xiàn)時(shí)，說(shuō)明有抗原抗體反應(yīng)。
瓊脂鋪板時(shí)要一次鋪成，并且鋪設(shè)均勻。
打孔時(shí)要注意垂直打孔，注意不要有裂隙產(chǎn)生。
篇二：中性粒細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)(小吞噬試驗(yàn))
中性粒細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)（小吞噬試驗(yàn)）
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
1.熟悉中性粒細(xì)胞的吞噬作用原理和方法。
實(shí)驗(yàn)原理 血液中的中性粒細(xì)胞即小吞噬細(xì)胞，通過(guò)趨化、調(diào)理、吞入和殺菌等幾個(gè)步驟，能吞噬和消化衰老、死亡細(xì)胞及病原微生物等異物，是機(jī)體非特異性免疫的重要組成部分。 實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)方法
片。
瑞氏染色法：取瑞氏染液數(shù)滴滴于上述血片上先染1分鐘。然后加等量蒸餾水， 輕輕晃動(dòng)混勻，繼續(xù)染5分鐘，水洗，用吸水紙吸干后鏡檢。
結(jié)果觀察 油鏡檢查：尋找中性粒細(xì)胞，如果染色結(jié)果正確，可見(jiàn)細(xì)胞核及被吞噬的細(xì)菌染成紫色，而粒細(xì)胞的細(xì)胞漿則為淡紅色。 中性粒細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
計(jì)數(shù)：1.吞噬百分率：觀察100個(gè)中性粒細(xì)胞，計(jì)算其中吞噬有細(xì)菌的中性粒細(xì)胞數(shù)，計(jì)算出吞噬細(xì)胞百分率。 2.吞噬指數(shù)：觀察100個(gè)中性粒細(xì)胞，計(jì)算其中被吞噬的細(xì)菌總
篇三：吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
-----吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)概要
本文介紹了吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)（Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte）實(shí)驗(yàn)的基本原理、操作步驟及注意事項(xiàng)等。
實(shí)驗(yàn)原理
吞噬細(xì)胞具有對(duì)異物(細(xì)菌、綿羊紅細(xì)胞、雞紅細(xì)胞等)吞噬和消化的功能，在機(jī)體非特異性免疫中發(fā)揮重要作用。
小鼠腹腔內(nèi)注射硫代乙醇酸鈉，可刺激巨噬細(xì)胞的聚集。四日后小鼠腹腔內(nèi)注入羊紅細(xì)胞懸液，一小時(shí)后解剖收集腹腔吞嗜細(xì)胞，染色、鏡檢可觀察對(duì)羊紅細(xì)胞的吞嗜現(xiàn)象。通過(guò)計(jì)算吞嗜百分比或吞噬指數(shù)可測(cè)定吞噬細(xì)胞的吞嗜功能。
主要試劑
1. PBS 緩沖液
2. 3％硫代乙醇酸鈉
3. 1％羊紅細(xì)胞懸液
4. 瑞氏染液
5. 甲醇
主要設(shè)備
1. 解剖器材
2. 注射器
3. 尖吸管
4. 橡皮吸頭
5. 小試管
6. 載玻片
實(shí)驗(yàn)材料
ICR 小鼠
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：用無(wú)菌注射器吸取3％硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內(nèi)。
2. 四日后，注射1％羊紅細(xì)胞懸液1ml 于小鼠腹腔內(nèi)。
3. 注射1 小時(shí)后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 預(yù)溫的PBS，同時(shí)用手反復(fù)揉搓腹腔約1—2 分鐘，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細(xì)胞。
4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內(nèi)。
5. 用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。
6. 觀察結(jié)果，也可以將腹腔液涂片，平放于濕盤內(nèi)，37℃，孵育30 分鐘。取出涂片，用預(yù)溫的PBS 沖洗3 次，然后用甲醇固定1 分鐘，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混勻后，滴于涂片上染色5-10 分鐘，以蒸餾水沖洗（切勿先將染液傾去）后，待干，鏡檢。
7. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
觀察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞對(duì)羊紅細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，計(jì)算吞噬百分比，即每100 個(gè)吞噬細(xì)胞中吞噬有羊紅細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)。也可用吞噬指數(shù)表示，即將100 個(gè)吞噬細(xì)胞中所吞噬羊紅細(xì)胞的總數(shù)除以100，即為吞噬指數(shù)。吞噬百分比和吞噬指數(shù)一般是平行的。
注意事項(xiàng)
1. 充分揉搓腹腔，盡可能將吞噬細(xì)胞沖洗下來(lái)。
2. 用尖吸管吸取腹腔液時(shí)，盡量避開(kāi)腹腔臟器，避免損傷血管引起出血，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 用瑞氏染液染色時(shí)，切勿先將染液傾去后再?zèng)_洗，以免染液中細(xì)小顆粒附著于玻片上影響標(biāo)本的清晰度。
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